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        人源Fab抗体文库构建服务

        卡梅德生物(KMD Bioscience)多年来致力于抗体领域研究。获得杂交瘤单克隆抗体序列信息是进行抗体重组改造,抗体药物发现的基础,而抗体的Fab片段则是抗体重组改造的主要区域。我们积累了丰富的抗体文库构建经验,能够为客户提供基于抗体噬菌体展示文库技术的人源Fab抗体文库构建服务。

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        抗体Fab简介:

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        Fab片段是抗体结构中可以与抗原结合的区域,也叫做抗原结合片段,涉及到抗体-抗原结合的亲和力,抗体特异性等特征。抗体Fab片段含有1个可变区(V区)和1个恒定区(C1),V区含有3个互补决定结构域(CDR),涉及到独特型抗体的产生,抗体的超频突变,尤其是CDR3结构域是抗体工程改造的核心区域;C1区主要起结构支撑作用。Fab抗体可以通过酶解法进行制备。

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        抗体文库制备服务人源Fab抗体库构建服务:

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        构建Fab抗体文库是获得高质量,高亲和力药物抗体的有效途径之一,高库容量(109-1012)的噬菌体展示Fab抗体文库提高了抗体工程改造速度,如重组人单克隆抗体,嵌合抗体的制备速度。

        ---Fab抗体库设计理念

        噬菌体展示Fab抗体文库的核心在于提高独立噬菌体展示克隆的数量,在卡梅德生物的实验室中,我们的科学家努力将抗体的可变区(VH和VL)基因,尤其是CDR区域(互补决定区)采用不同的策略和方式,如氨基酸突变,移码读框等形成数目较大的独立克隆。此外我们设计了一套方案:在体外对人外周血单核细胞进行敏化处理后,通过流式分选技术分离出高亲和力的单核细胞,进行EBV单克隆化处理,利用该方法能够获得高度一致性的单核细胞克隆,再进行文库建设。

        ---噬菌体宿主体系选择

        卡梅德生物拥有M13,T4和T7噬菌体展示系统,根据客户的项目需求(展示的蛋白或抗体片段的大小等参数),我们会采用不同的噬菌体系列进行文库构建。

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        项目流程:

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        步骤

        服务内容

        周期

        外周血单核细胞单克隆化

        * 获取外周血单核细胞

        * 单核细胞敏化

        * EBV病毒单克隆化

        * 流式细胞分选后单克隆培养

        8-12周

        抗体cDNA制备

        (客户可以提供细胞)

        * 总RNA提取

        * 高保真RT-PCR制备cDNA

        * 系统对照:Actin特异引物PCR扩增,以鉴定逆转录产品cDNA质量

        构建抗体库

        * 引物设计与合成:抗体可变区兼并引物设计、合成

        * 以cDNA为模板,PCR扩增抗体重链和轻链可变区基因

        * scFv基因拼接

        * 噬粒构建与转化:酶切、连接scFv和噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库

        * 鉴定:随机挑选20-50个克隆,PCR鉴定阳性率,测序和分析抗体序列

        * 包装,>1?1013噬菌体颗粒/ml

        交付

        * 构建报告,包括详细建程序,代表性序列信息

        * 产品交付:细菌和噬菌体两种形式抗体库

        ?1.客户提供人外周血淋巴细胞,淋巴结细胞或脾脏细胞(保存在RNA later等溶液中,避免RNA降解,蓝冰运输),从第二步开始制备Fab抗体文库,只需8-9周即可完成。

        2.?采用TriZol溶液制备细胞裂解物,干冰运输。?

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        技术流程:

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        服务优势:

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        --免疫,合成抗体噬菌体文库构建

        --周期短:预制抗体文库筛选服务

        --严谨完整的QC标准

        --高库容量:独立克隆数107 - 1012

        --个性化的文库淘筛策略

        --高亲和力抗体制备:10-7-10-13

        --多种噬菌体展示系统:M13,T4,T7

        --完整的上下游服务:提供从抗体制备、抗体测序,抗体标记修饰,到抗体人源化等一站式技术服务,节约客户宝贵时间和经费

        --服务可定制:根据客户需求制备,为每一个客户量身定制实验方案,满足每一位客户的特殊需求

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        如何订购?

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