卡梅德生物科技（天津）有限公司
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卡梅德生物（KMD?Bioscience）多年从事重组蛋白表达与制备研究，拥有经验丰富的技术团队，积累了充足的重组抗体和重组蛋白制备经验，建立了完善的蛋白表达与纯化体系，为不同种属和性质的蛋白表达与纯化提供多种选择。我们的技术人员可以根据蛋白性质以及客户需求设计最佳的蛋白表达方案，选择合适的表达体系，采用不同类型的蛋白纯化技术对目的蛋白进行纯化，能够为客户提供高品质高纯度的重组蛋白纯化服务。
GST融合蛋白是分子生物学领域的基本工具，其广泛用于蛋白质-DNA及蛋白-蛋白间的相互作用研究。例如，GST pull-down利用了GST对谷胱甘肽（GSH）偶联球珠的亲和性，将GST融合蛋白与谷胱甘肽偶联球珠结合，并从蛋白的混合液中纯化得到与GST融合蛋白相互作用的蛋白。GST是一个含有211个氨基酸的蛋白，通常将该蛋白加入到重组蛋白的末端以便对该重组蛋白进行纯化或检测。由于GST对于其底物-谷胱甘肽具有极高的特异性，所以可以获得更高纯度的蛋白。
卡梅德生物提供GST融合蛋白纯化服务，严格的控制体系保证交付蛋白的纯度和质量。我们拥有不同体积的发酵罐和多元化的重组蛋白纯化体系，可以满足高通量及大规模的重组蛋白表达需求。基于抗体平台、蛋白平台等完善的平台体系建设，我们涵盖了从基因合成、载体构建到蛋白表达及纯化等一站式服务。
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GST融合蛋白纯化简介：
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GST (Glutathione S-transferase)，即谷胱甘肽巯基转移酶，全长211个氨基酸，分子量为26kDa，广泛应用于重组蛋白表达以及亲和纯化实验中。GST具有高度的亲水性，因此也常被用于改善目的蛋白的可溶性。例如某些蛋白进行6′His 融合表达的时候，如果产生的蛋白可溶性较差，可以采用更换质粒载体的方法进行GST融合表达以改进目的蛋白的可溶性。
GST纯化系统是利用GST融合蛋白与固定的谷胱甘肽（GSH）通过二硫键共价亲和，通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。GST能够催化GSH形成GS-GST的复合物。根据这一特点，将GSH交联到琼脂糖凝胶颗粒(Beads)上后，利用GST的催化能力形成Bead-GS-GST-protein的复合物从而将目的蛋白从复杂的混合物中纯化出来。
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服务内容：
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步骤 |
服务内容 |
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Step 1 |
* 从LB平板上挑取单克隆接种到2ml LB液中(Amp+)，220-250rpm，37℃振荡培养至OD600值约为0.6 |
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Step 2 |
* 将活化后菌体接种到TB培养基中，测定起始OD600值，37℃振荡培养，当OD600值增加0.6-1.0单位时，加入IPTG至终浓度10μM继续摇床培养3-4h |
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Step 3 |
* 4000rpm离心10min收集菌体 |
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Step 4 |
* 5-10倍柱体积的lysis buffer重悬细菌，加入PMSF等蛋白酶抑制剂，超声400-600瓦破碎细胞 |
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Step 5 |
* 4℃，8000rpm，离心20min取上清过谷胱甘肽琼脂糖柱 |
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Step 6 |
* 过柱前后，均用5′柱体积的lysis buffer洗层析柱，收集流穿液 |
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Step 7 |
* Elution buffer洗脱，收集洗脱峰前，峰中间和峰后，SDS-PAGE鉴定纯度 |
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Step 8 |
* GST标签移除：凝血酶等酶切后，非变性胶分离纯化 |
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GST融合蛋白优点：
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--增加外源蛋白的可溶性
--适用范围广，可在不同宿主中表达
--可用不同的蛋白酶方便去除
--高特异性，纯化方便且温和
--提高外源蛋白的稳定性
--保留了蛋白的抗原性和生物活性
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服务优势：
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--适用范围广，可在不同宿主中表达
--特异性好，纯化方便且温和
--丰富的经验积累，成熟的技术路线，保证获得的纯品蛋白可以满足后续精细实验要求
--拥有多种重组蛋白表达系统和多种纯化体系
--完整的上下游服务：提供从基因合成、载体构建到蛋白表达及纯化的一站式服务
--服务可定制：根据客户需求制备，为客户提供包括信息咨询，详细实验方案的设计与实施等相关服务
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实验案例：
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-- 重组GST-VER2纯化：Lane 1，未诱导细胞裂解液； Lane 2，IPTG诱导，箭头所示为目的蛋白； Lane M，markers。
-- 纯化VER2 蛋白： Lane 1，纯化 GST-VER2重组蛋白； Lane 2，凝血酶消化GST-VER2；Lane 3，纯化 VER2；Lane M，markers。
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关于更多GST融合蛋白纯化的技术问题，请查看我们的技术资料或者联系我们的技术支持人员获得进一步的帮助。
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