卡梅德生物科技（天津）有限公司
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蛋白质-蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。这种相互作用是生命体系中最基本的一种现象。蛋白质是生命体系中最重要的分子之一，它们在细胞内扮演着重要的角色，如催化反应、传递信号、维持细胞结构等。蛋白互作服务应用广泛，主要可以应用于药物研发、新型生物传感器，并且在信号转导、代谢过程和基因调控等方面也扮演着重要角色。
卡梅德生物（KMD Bioscience）多年来致力于蛋白表达研究，依托于完善的蛋白平台，拥有精密的蛋白检测设备及技术，能够提供从重组蛋白制备到蛋白表达及纯化，蛋白功能研究等一站式高品质技术服务。我们可以为客户提供酵母双杂交、Western Blot、Pull Down和Co-IP等常用的蛋白互作检测服务，助力您的科研实验。
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图1 蛋白互作示意图?
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蛋白互作检测服务：
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1、酵母双杂交服务
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?酵母双杂交系统是一种体内方法，用于鉴定编码蛋白质与目标蛋白质相互作用的新基因技术。我们的酵母杂交系统是由基于SMART法构建的文库、酵母菌株、严谨的报告基因、高表达载体组成的。这项技术可用于：研究蛋白的相互作用；确认蛋白的交互作用；定义蛋白的交互域。
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实验流程：
（1）创建BD-X诱饵；
（2）通过BD-X诱饵测试自我激活；
（3）执行酵母双杂交筛选和识别猎物。?
图2 酵母双杂交及其修饰?
优点：
1）在检测微弱和瞬时蛋白质相互作用方面具有很高的灵敏度。
2）简单快速地得到编码相互作用蛋白的基因序列，只需构建质粒无需准备抗体或纯化蛋白，没有蛋白抽提、纯化等步骤。
3）高效性、可靠性。
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Western Blot（WB）即蛋白质印迹法，又称免疫印迹，是定性、定量检测蛋白表达的常用技术方法之一。WB的主要目的是检测样本（组织或细胞）中某种蛋白质（即靶蛋白）是否表达以及表达的相对丰度。抗体与细胞或生物组织样品中目的蛋白特异性识别结合，根据着色的位置和着色深度可以分析细胞或组织中特定蛋白水平的表达情况。
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实验流程：
（1）样品制备。
（2）SDS-PAGE。
（3）转膜、封闭。
（4）一抗、二抗孵育、显色。
（5）检测、分析。
图3 免疫印迹实验流程图?
优点：
1）所需要的设备方便，成本低，使用灵活。
2）操作简单，结果一般比较稳定，而且阳性结果一般较为可靠。
3）结果分析与质谱相比较容易。
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Pull Down实验服务是在体外条件下检测分子间相互作用的方法。通过该技术可以验证蛋白互作或筛选获取相应的目的蛋白。卡梅德生物已经建立并完善了GST融合蛋白pull-down技术。GST pull-down又叫做蛋白质体外结合实验，是在体外条件下验证或寻找蛋白质间相互作用的方法。
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实验流程：
（1）构建GST融合蛋白。
（2）细胞处理与裂解液制备。
（3）总蛋白定量。
（4）GST融合蛋白低温孵育、洗涤、洗脱。
（5）SDS-PAGE、WB或 MS检测。
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图4 GST pull-down 实验流程图?
优点：
1）适用范围广，多采用标签抗体来检测（如GST）。
2）操作简单，是可直接检测蛋白质间相互作用的有效方法。
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免疫共沉淀（Co-IP）利用抗体的特异性，从复杂的样品混合物中分离出目标蛋白(抗原)。包括3种不同方法：经典方法、定向亲和法和直接亲和法。经典方法是将抗体与样本孵育，然后依次结合到琼脂糖树脂交联的蛋白A/G，回收目标抗原。经过洗脱，凝胶电泳分离，结合Western Blot等技术定量或定性的分析样品中特定抗原的含量情况。
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实验流程：
（1）样本蛋白准备。
（2）抗原抗体结合。
（3）Protein A磁珠捕获蛋白复合物。
（4）洗脱蛋白复合物。
（5）SDS-PAGE或WB检测。
图5 免疫共沉淀流程图
优点：
1）互作的蛋白经过翻译后修饰，均处于天然状态。
2）蛋白互作是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响。
3）分离得到的互作蛋白复合物都是天然状态的。
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