卡梅德生物科技（天津）有限公司
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酵母表达既具有原核表达操作简单、高效、成本低的特点，又兼具了真核表达能够进行蛋白加工折叠和翻译后修饰等优势。重组蛋白既可以分泌形式又可以非分泌形式在酵母系统中表达，且能高水平表达，达到5g/L；外源蛋白基因可以以整合的方式插入到酵母染色体上，随染色体复制而不会丢失；酵母具有真核生物的亚细胞结构，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能，适合活性蛋白表达；容易实现超高密度发酵。
卡梅德生物拥有丰富的酵母表达制备经验，可以为客户提供多种规模的蛋白发酵服务，配合我们完善的蛋白纯化平台，可以在短时间内为客户提供高质量的重组蛋白产品。卡梅德生物拥有完整成熟的酵母表达系统，从基因合成到蛋白表达纯化提供一站式服务，我们有pPICZaA、pGAPZaA、pPIC9K等多种表达载体以及X33、GS115和酿酒酵母等菌株，同时配备多种蛋白纯化方法，可以满足客户不同的蛋白表达需求，为客户定制完整的蛋白表达纯化方案。
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酵母表达载体选择：
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表达载体通常要根据基因的表达目的来进行选择酵母表达系统载体可分为胞内表达载体和胞外表达载体。胞内表达载体有pGAP系列和pPIC3.5K，胞内表达载体可使目的蛋白在胞内表达，可避免酵母的过度糖基化，适用于在胞浆表达或不含二硫键的非糖基化蛋白，选用胞内表达载体表达水平高但后续的纯化相对复杂；胞外表达载体常见的是pPIC9K，可以使目的蛋白分泌到胞外，纯化相对简单。
卡梅德除了提供多种毕赤酵母外，还提供酿酒酵母，配合大规模发酵，可以提供工业级需求的服务。
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应用场景：
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酵母表达系统是一种最经济高效的真核蛋白表达系统，可以成功实现胞内表达或是分泌表达，且其放大培养基相对廉价，培养条件要求不高，适宜工业放大。与哺乳动物细胞表达系统一样，酵母蛋白表达系统能够对所表达蛋白进行例如糖基化、酰基化、脂基化、磷酸基化等保证蛋白天然构象的修饰，可用于制备非常接近天然蛋白的具有高附加值的蛋白原料。利用酵母表达系统人们已经成功地表达了多种生物（包括细菌、真菌、病毒、原生生物、植物、脊椎动物、人类）的许多蛋白质，涉及酶类、蛋白酶体、蛋白酶体抑制物、受体、单链抗体、抗原、调控蛋白等多种蛋白质。在医学领域，酵母表达系统已经成功地应用于基因工程疫苗制备、基因工程药物制备（如抗体药物、蛋白质药物）和蛋白质功能研究等。
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蛋白酵母分泌表达步骤和周期：
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步骤 |
服务内容 |
周期 |
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表达载体构建 |
密码子优化，基因合成（或基因模板扩增） |
1-2周 |
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将目的基因亚克隆至合适的载体 |
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拼接序列验证：测序 |
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交付：构建正确的重组表达质粒、菌株及测序原始报告 |
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菌株转化 |
选择合适的菌株进行转化 |
2周 |
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培养6-10个阳性克隆进行重组蛋白的诱导表达 |
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SDS-PAGE检测 |
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交付：阳性克隆菌株、表达筛选结果报告 |
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表达菌株筛选 |
检测重组蛋白表达情况（适用于多拷贝数和高表达菌株）
交付：阳性克隆菌株、表达筛选结果报告 |
2周 |
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菌株表达优化 |
优化培养条件（培养基、菌液OD值、甲醇浓度、诱导温度及时间等），提高目的蛋白的产量 |
2周 |
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小规模蛋白表达及纯化 |
1L发酵液纯化表达的重组蛋白并进行SDS-PAGE检测 |
2-3周 |
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交付：重组蛋白0.02-3mg及纯化报告。纯度>85% |
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大规模蛋白表达及纯化 |
80L、130L、250L和500L发酵罐 |
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增值服务 |
通过HPLC，质谱等方法详细检测目标蛋白的质量
蛋白质N端测序：PPSQ31（Edman降解法测序仪） |
1-2周 |
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酵母表达实验流程：
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服务优势：
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--密码子优化：包含稀有密码子分析，蛋白亲水性分析和跨膜结构域的预测分析
--分泌蛋白表达，接近天然构象的重组蛋白
--多种规模蛋白发酵模式：小规模（500ml、10L）和大规模（80L、130L、250L和500L发酵罐）
--高纯度毫克级，克级重组蛋白；稳定的批间一致性
--低内毒素：LAL检测法<0.1EU/ug
--完整的GMP文件支撑体系，保证实验信息可追溯
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